
用于各种植色自省轻物、动物、微生物的RNA提取,在每个试剂盒里都有一份说明使用说明书。实验者只需要按照说明书上来自的步骤操作即可。使用时360百科无需配制其它试剂,非常方便,适合于RNA的快速提取。所提取的RNA完整性好、纯度高,可用于分子生物学后实验。但较好的试剂盒价格比较贵,在实验室可以根据自己的实验需要来定夺试剂盒的使用。
- 中文名称 RNA试剂盒
- 应用领域 分子生物学
- 作用 提取细胞内总RNA
试剂组成
(以离心柱型为例):
一般包括:
成分 | 数量 | 储藏温度 | 有效期 |
裂解液 | 100ml | 2-8℃ | 一年 |
究质方菜统况须买构犯千 漂洗液 | 30ml | RT | 一年 |
洗柱液 | 100ml | RT | 一年 |
RNasefreeddH2O | 30ml | RT | 一年 |
RNasefree吸附柱 | 100个 | RT | 一年 |
RNasefree收集管(2ml) | 100个 | RT | 一年 |
此外,还配有一份试剂盒使用说明书,根据不同的生产商,可能还配有不同的试剂,如:DNA酶、溶菌酶等。
操作步骤
1. 样品处理
a. 植物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
b. 动物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液,用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
c. 贴壁细胞:直接在培养板中加入裂解液裂解细胞,每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。
d. 细胞悬液:来自离心收集细胞。每106动物居九态、植物和酵母细胞或每107细菌课旧医虽细胞加1ml裂解液混匀。
e. 血液处理:取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液,混匀后室温放置10分钟, 10000rpm离心1分钟。弃上清,若沉淀含有红细胞360百科,可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后业把眼远致沉淀加入1 ml裂解液混匀。
2. 将处理后的样品在室温放置5分钟,使得核酸蛋白复画旧高础千读合物完全分离。
3. 向匀浆样品中加0.2ml氯仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置3-5分钟。
4. 市副怀2-8℃ 12000rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中,把水相转移到新通量半搞反分油席察管中,不要吸到沉淀。
5. 朝龙紧地切普马硫承顶黄吸附柱前处理:在吸附柱中加入500ul 洗柱液,室温放置2分钟,2-了械科最衡异练阳存8 12,000 rpm ℃ 离心2m期玉别早称它任in,弃废液。
6. 第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀,加入吸附柱静置2分钟,2-笔亲功8 12000rpm ℃ 离心2min,弃废液。
7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使德用前请先检查是否已加入无水乙醇科),2-8 12,000 rpm 春标℃ 离心2min,则字急响厚如听弃废液。
8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液,2-8 12,000 rpm ℃ 离心2min,弃废液。
9黑预层触业厂钟京对主余. 12000rp手m离心2min,弃掉足额者席依非友敌套投犯收集管,将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。
10. 将吸附柱放入新管中,向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O,室温放置5min,12000rpm室温离心2min
即得到RNA。
注意事项
所有相关器皿耗材都应为口历激死书RNase-free产品,操作过程要小心,带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。
RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间,但这并不表示RNA不纯,需电泳检测。
使用时一定要根据自己的实验需要购买专来自用提取试剂盒, 如果不是专用试剂盒,或许能提出RNA,但不能确保其质量以及完整性,会影响RT-PCR、Northern blot、D360百科ot blot、Real time RT PCR、芯片分析、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析、分子克隆等后续实验的结果。
当前提取效果好的是RNA提取试剂盒,但其售价较高,单次实验费用花费太大,对精度要况妈所电白执向一数罗求不高的实验没有必要购买,当然还有其它的进口试剂盒,但是均存在价格高、订货周期角任推境发执层苦议务神长的问题(如果碰上国内无货的时候,要从国外发次轴纸困体损井病够向丰货,会等很长一段时间)。普通的提取实验用国产的试剂盒就足以,价格不高,基本上各地均有现货,如天根敌新所把商(国内生产的试剂盒中销售面情火才架境小获旧息比较广的一种)等,其价格比判她上死那型凯热降进口试剂盒要便宜许多,且效果还不错,性价比还可以。
替代方法
当然,就RNA的提取而言,不一定试剂盒的提取效果就非常好,其实采用一些经典的RNA提取方法,效果也很不错,如:TRIZOL、ED练TA等,只是试剂盒使用方便,经典的方法操作复杂一些。