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SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

2023-02-13 22:17:00 暂无评论 百科资料
聚丙烯酰胺凝胶电泳(英语: p围益志静问杂矛olyacr来自ylamide gelel志亮充候顶计乐冲配ectrophoresis,简称PAGE) 作用:用于分离蛋白质代流值和寡核苷酸。

简介

  聚丙烯酰胺凝胶电泳(英语: 云束持步立训也叶肥帝质polyacrylamide gel electrophoresis,简称PAGE) 作用:用于分离蛋白质和寡核苷酸。作用原理:聚丙烯酰胺凝胶为网状结构,具来自有分子筛效应。它有北之载卷两种形式:非变性聚丙汽介层跟画至的烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)及SDS-聚丙烯酰胺凝胶喜放盟音思简队班货究急(SDS-PAGE);非变性聚丙烯酰胺凝胶,在电泳的过程中,蛋白质能够保说办持完整状态,并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开。

  而SDS-P神草十表十未重记争AGE仅根据蛋白质亚基分子量的不同就可以分开蛋白质。该技术最初由shapiro于1967年建立,他们发现在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂(SDS即十二烷基360百科磺酸钠)后,蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小(可以忽略电荷因素)。

作用

  SDS是阴离子去污剂,作为变性剂和助溶试剂,它能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白分子的二、三级结构。而强还原剂如巯基乙醇,二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后,分子伟百抓有湖被说生县针危被解聚成多肽链,解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束,所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量,这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。

  SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统,与连续缓冲系零认足径剧统相比,能够有较高的分辨率。

  浓缩胶的作用尽死积木低施胡续孙是有堆积作用,凝胶浓度较小,孔径较大,把较稀的样品加在浓缩胶上,经过大孔径百兴展子凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选TRIS/HCl缓冲液,电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后,HCl解离成氯离子,甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白渐山算杨针一染临质带负电荷,因此一起向正极移动,其中氯离子最快,甘氨酸根离子最慢,蛋白居中。电泳开始时氯离子泳动率最大,超过蛋白,因此在后面形成菜德黑既不杂落低电导区,而电场强度与低电导区成反比,因而产生流策往考拉特端加回较高的电场强度,使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动,形成以稳定的界面,使蛋白聚集在移动界面附近,浓缩成一中间层。

  此鉴定方法中,蛋白质的迁移率主要取决于它的相对分子质量,而与所带电荷和分子形状无关。

补充信

  聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE(Polyacrylamide gel electrophoresis)聚丙烯酰氨凝胶电泳,是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持地扬工介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由来自单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成,聚合过程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有两种:化学聚合法和光聚合法。化学针研聚合以过硫酸铵(360百科AP)为催化剂,以四甲基乙二胺(TEMED)为加速剂。在聚合过程中,TEMED催化过硫酸铵产生自由基,后者引发丙烯酰胺单体聚合,同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联,从而形成三维网状结构。

  PAGE根据其有无浓缩效应,分为连续系统和不连续系统两大类,连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同,带电颗粒在电场作用下,主要靠电荷和分子筛效应。不连续系统中由于缓冲液离子成分,pH,凝胶浓度及电位梯度的不连续性,带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应,分子筛效应,还具有浓缩效应,因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成。浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶,凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HCl。分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶,凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HC室蒸面利音笑少感况l。电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使向回不连续体系形成了凝必印次胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性,这是样细毛圆另神须半温耐好机品浓缩的主要因素。

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