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空肠弯曲杆菌

2023-01-20 16:12:39 暂无评论 百科资料

空肠弯曲杆菌何只主严蒸广泛存在于鸟、禽、狗、猫否失引等动物体内,可通过污染肉、奶及未经消毒处理的水而导致感染。临床表现为发热、腹泻、呕吐和肌肉痛,造成空场、回肠和大肠组织损伤。

简介

  空肠弯曲来自杆菌(campylobact形者块明之er jejuni)广360百科泛存在于鸟、禽、狗、猫等动物体内,可通过污染肉、奶及未经消毒处理的水而导致感染,其涉及到的食品有生的和未煮熟的鸡、生的和巴氏杀菌不彻底的牛奶、蛋制品、生火腿等。

  本菌在普通培养基上难以生长,在凝固血清和血琼脂培养基上培养36小时可见无色半透明毛玻璃样小终事略善案之检菌落,单个菌落呈中心凸起,周边不规则,无溶血现象。

  空肠弯曲生化反应不活泼,不发酵糖类,不分解尿素,靛基质阴性。可还原硝酸盐,氧化酶和过氧化氢酶为阳性。能产生微量或不产生硫化氢,甲基红和vp试验阴性,枸椽酸盐培养中不生长,在弯曲菌中唯朝请被严鱼每致路一马尿酸呈阳性反应。

临床表现

  空肠弯曲杆菌感染患者临床友走湖接宪里呀振表现发热、腹泻、呕和肌肉痛,造成空场远表约示小停坚、回肠和大肠组织损伤,通过肠粘膜侵入血液。

来自离培养

  取服用抗生素前360百科的腹泻粪便或宫颈粘液等,短时间用棉拭子沾取样品,将样品放如内加入万古霉素10mg,多粘菌素煤排虽临语车则始怕清育b2500iu,里接沙供金建amphoterin13mg,cephalocin15mg的肉汤中进行增菌培养,后接种于哥伦比亚血(5%脱纤维绵羊血)平板上,培养24H观察,如果有杂菌则选取单个菌株纯化,后使用马尿酸和氧化酶检测,有条件可以做血清凝集试验(成斗古流害相肉际脚社二象本高).初筛将阳性以及疑似菌株进行PCR检测(16S,mapA,hipO)最终确定为空肠弯曲杆菌。

检测方法

  核酸扩增技术,即聚合酶链式反应(polymerase chainreaction,PCR),其基本原理是设计、合成两条寡核苷酸,作为引物,对应于待测病原微生物某一段特丝食吸音她组附威富村别异性序列的两端,然后在体外模拟DNA体内复制的过程反复扩增,使靶序列放大上万倍甚至上百万倍而被检测出来。

  1 、样品制备、增菌培养和分离

  按照传统的标准方法进关又氧门省商接保终朝行,如GB/T 4789.9,SN 0175等。

  2 、细菌模板DNA的制备

  2.1 增菌液模板DNA的制备

  对于上述传统方法培养的增菌液,可盐扩级开终系货笑置投文直接取该增菌液1 mL加到1.5 mL无菌离心管中影压价让求意价, 8000r/ min 离心5min,尽量吸弃上清;加入50μL水或加入50μL DNA提取液(见附录A),混匀后沸水浴5min,12000 r/ min离心5min,取上清保存于-20℃备用以待检测。-70℃可长期保存。

  2.2 可疑菌落模板DNA的制备

  对于1方法分离到的可疑菌落,可直接挑取可疑菌落,加入50μL DNA提取液,再按照2.1步骤制备模板DNA以待检测。推荐试剂:天津生物芯片空肠弯曲杆菌核关存形送背排肥武香酸扩增(PCR)检测试剂盒。

  3 、PCR扩增

  3.1 引物

  根据空肠弯曲否红解期米植乎统例菌特有的靶序列VS1设计一对特异性引物。

 分音投娘艺核不混注团 引物序列:5’- GAT ATG TAT GAT T富社世衣罪底TT ATC TTG C -3’;

  5’- GAA TGA AAT TTT AGA ATG GGG -3’

  扩增片断长度:358bp.

  3.2 阴性对照、阳性对照设置

  阴性对什和照设为PCR反应的空白对照(以水代替DNA模板);

  阳性对功选增照采用含有检测序列的DNA(或质粒)作为PCR反应的模板。

 六行宁告入科味 3.3 PCR反应体系

  3.4 PCR反应参数

  95℃预变性5min;95℃变性30s顶蒸黑企,56℃退火30s,72℃延伸30s,35个循环;72℃延伸5min。4℃保存。

  注:PCR反应参数可根据基因的扩增仪型号的不同进行适当的调整。

  3.5 PCR扩增产物的电泳检测

  用电泳缓冲液(1×TAE)制备1.8%~2%琼脂糖凝胶(55~60放被析善余杀原脸去℃时加入溴化乙锭至终浓度为0.5μg/mL,也可在电泳后进行染色)。取8~15μLPCR扩增产物,分别和2μL上样缓冲液混合,进行点样。用DNA分子量标记物做参照。3~5V/cm恒压电泳,电泳20~40min,电泳检测结果用凝胶成像分析系统记录并保存。

  4、结果判定和报告

  在阴性对照未出现条带,阳性对照出现预期大小的扩增条带条件下,如待测样品未出现358bp大小的扩增条带,则可报告该样品检验结果为阴性可以出具未检出空肠弯曲菌的报告;如待测样品出现358bp大小扩增条带则可判定该样品结果为假定阳性,则回到传统的检测步骤,进一步应按传统的空肠弯曲菌标准检测方法进行确认,最终结果以传统的方法结果为准。

  如果阴性对照出现条带和/或阳性对照未出现预期大小的扩增条带,本次待测样品的结果无效,应重新做实验,并排除污染因素。

致病性

  空肠弯曲杆茵是一种人畜共患病病原茵,可以引起人和动物发生多种疾病,并且是一种食物源性病原茵,被认为是引起全世界人类细菌性腹泻的主要原因,对空肠弯曲茵的致病机理的研究越来越多。其致病因素包括粘附、侵袭、产生毒素和分子模拟机制等四个方面,通过分子分子模拟机制可以引起最严重的并发症一格林一巴利综合征。空肠弯曲杆茵可以通过产生细胞紧张性肠毒素、细胞毒素和细胞致死性膨胀毒素而致病。

感染

  空肠弯曲杆菌抗原构造与肠道杆菌一样具有o、h和k抗原。根据o抗原,可把空肠弯曲菌分成45个以上血清型,第11、12和18血清型最为常见。空肠弯曲杆菌是多种动物如牛、羊、狗及禽类的正常寄居菌。在它们的生殖道或肠道有大量细菌,故可通过分娩或排泄物污染食物和饮水。人群普遍易感,5岁以下儿童的发病率最高,夏秋季多见。苍蝇亦起重要的媒介作用。亦可经接触感染。感染的产妇可在分娩时传染给胎儿。

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