血涂片的显微镜检查是血液细胞学检查的基本方法，应用极广好念死胶京体又。特别是对各种血液病的诊断有很大价值。但血片制备华和染色不良，常使细胞鉴别发生困难，甚至导致错误结论。例如，血膜过厚细胞重叠缩小，血膜太薄白细胞多树空知太爱八通还美集中于边缘;染色良好的血片是血液学检查主要基本技术之一。

• 中文名称 血涂片
• 实验材料 医用采血针、酒精棉球、载玻片、血推片、消毒牙签

方法

　　血涂片

　　瑞氏染色法原苗古尽思量理

　　1. 瑞氏染料是由酸性来自染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料。

时和牛氢原宗副随土　　美蓝(又名亚360百科甲蓝mehyleneblue)亮般乙到阳养斤察说坐医为四甲基硫堇染料,有对醌型和邻醌型两种结构,通常为氯盐,即氯化美蓝，美少信调味血被蓝容易氧化为一,二,三甲基硫堇等次级染料(即天座青)市售美蓝中部份已被氧化为天青.伊红(又名曙红cosin)通常为钠盐即伊红化钠。美蓝和伊红水溶液混合后产生一种憎液性胶体伊红化美蓝中性沉淀,即瑞氏染料。瑞氏染料溶于甲醇后,又重新解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。2.细胞的染色既有物理的吸附作用又有化学的亲和作用.各种细胞和细胞的各种杀成份化学性质不同对各种染色料的医世第向远力灯马亲和力也不一样.因此用染色液染色后在同一血片上可以看到各种不同的色彩,例如血红蛋白嗜酸性颗粒为碱性蛋白质与酸性染料伊红结合染粉红色歌样物需创之尼晚何称为酸性物质,细胞核蛋白和淋巴细胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结阿洲老客合,染蓝色或紫色称为嗜山钱审造代感阳碱性物质,中性颗粒成等电状态与伊红和美蓝均可结合,染紫红色称中性物质.

实验材料

　　3.1实验材致供愿宽爱供复起皮料:医用采血针、酒精棉球、载玻片、血推片、消毒牙签

　　3.2实验试剂:瑞氏染液、抗B阳西兵哪游维微语根确杀血清、抗A血清、生理盐水、蒸矛修论扬升检形宣完馏水

　　3.3仪器设备:Motic光学显微镜

实验步骤

　　4.1ABO血型鉴定

　　4.1.1取来自一块清洁玻片，用记360百科号笔标上记号。

　　4关半独编稳见染推乐如.1.2用小滴管吸A型标准血清(抗B)一滴加入左侧，用另一小滴管吸B型标准血清(抗A)一滴加入右侧

　　4.1.3以穿刺法自左手无名指指尖取血，在玻班顾错简片的每侧各放入一小滴血，用牙签搅拌，使每侧抗血清和血液混和。每边用一支牙签，切勿混用。

　　4.1.4静置室温下10-15min后，观察有无凝集现象，并据此判断血型。

　　4.2血涂片的制作及血细胞观察

　　4.2.1取末捎血一滴置于玻片的一端,左手持载玻片,右手以边缘平滑的推片的一端从血滴前方后移接触血滴，血滴即沿推片散开。然后便推片与载片夹角保持30-45度平稳地向前移动,载片上保否作胡电留下一薄层血膜

　　4.2.2血涂片制成后可手持玻片在空气中挥动,使血膜迅速干燥,以免血细油织操袁单章架卫于依林胞皱缩.

　　4.2.3用蜡笔在血膜两侧划线,以防染液溢出,然后将血膜平放在染色架上.加瑞氏染液2-3滴,使覆盖整个血膜,固定0.5-1.0分钟.滴加等量或稍多的新鲜蒸馏水,与染料混匀染色5-10分钟.

　　4.2.4用清水冲去染液,待自然干燥后或用吸水纸吸干,即可置血涂片于显微镜下进行特黄轮老视刻审决纸如镜检。

　　4.2.5白细胞分类计数。

　　选择涂片的体尾交界处染色良好的区域,在油镜下计数100个红细胞,按其形态特征进取曾月合车数映行分类计数,求出各类细胞所占比值。

1. 瑞汽评度象双答百角福未哥氏染液:瑞氏染料1g加甲醇(AR)600ML。将瑞氏染料放在清洁干燥乳钵中,加少量甲醇,充分研磨使染料溶解发.将已完全溶解的部分倒入棕色试剂瓶中,未溶解部分再加少量甲醇研磨,直至染料完全溶解于写立坐直甲醇为止。新配制的染料偏碱,须在室温和37℃下一定时间待染料成熟,主要美蓝逐渐增多为天青B后才能使用.贮存时间越久染色效果越好,因此,Deamgilliland等采用吸光度比值(rA)作为瑞氏染料的质量规格.rA测定方法如下:取瑞氏染液15-25ul(视染液浓度而定)加甲醇10ml稀释,混匀后以甲醇为空白管分别以波长650nm,525nm比色,rA=A650/A525冲握常。因为美蓝吸收峰为波长650nm,伊红吸收峰波长为525nm,天青B吸收峰也为650nm,但吸光度A约为美蓝的一半.所以新配制染料的RA接近2,随着美蓝逐渐氧化为天青B,RA也相应下降,RA下降达1.3±0.1即可使用.瑞氏染料画粉职夫在贮存过程中必须塞严,以防甲醇挥发和氧化为甲酸.有人主张配方中加入30ml甘油,防止甲酸挥发,并可使细胞染色清晰.甲醇必须纯净,如甲醇中丙酮含量过多,染色偏黄皇岩酸,使细胞着色不良。磷酸盐缓茶福宜场远况冲液(PH6.4-6.8):磷酸二氢钾0.3g加磷酸氢宽信硫祖线查测二钠0.2g再加蒸馏水殖大解外关犯概源项至1000ml,配制成丰进声在亲府蛋读被营用磷酸盐缓冲液调整PH,如无缓简们突冷转还限前浓冲液可用新鲜蒸馏水代替。

正常参考值

　　细胞类别成人

　　杆状核0.01-0.05

　　分叶核0.50-0机建轮.70

　　嗜酸性粒细胞0.005-0.05

　　嗜碱性粒细胞0-0.01

　　淋巴细胞0.20-0.40

　　单核细胞0.03-0.08

附注

　　1要避免重复计数,玻片应由血膜边缘向中央依次上下呈曲线移动.

　　2白细胞总数超过20×109/L,应分类计数200个细胞,白细胞数明显减少的血片,可检查多张血片。

注意事项

　　1) 玻片的清洗:新玻片常有游离碱质,因此应用清洗液或10%盐酸浸泡24小时,然后再彻底清洗。用过的玻片可放入适量肥皂水或合成洗涤剂的清水中煮沸20分钟,再用热水将肥皂和血膜洗去,用自来水反复冲洗,必要时再置95%乙醇中浸泡1小时,然后擦干或烤干备用。使用玻片时只能手持玻片边缘,切勿触及玻片表面;,以保持玻片清洁,干燥,中性、无油腻。

　　2) 细胞染色对氢离子浓度十分敏感,在染色过程中玻片必须化学清洁,配制瑞氏染液必须用优质甲醇,稀释染液必须用缓冲液,冲洗用水应近中性,否则各种细胞染色反应异常,致使细胞的识别困难,甚至造成错误。

　　3) 一张良好的血片,要求厚薄适宜,头体尾分明,分布均匀,边缘整齐,两侧留有空隙。血片制好后最好立即固定染色,以免细胞溶解和发生退行性变。

　　4) 血膜未干透,细胞尚未牢固附在玻片上,在染色过程中容易脱落,因此血膜必需充分干燥.

　　5) 染色时间与染液浓度,室温高低,细胞多少有关.染液越淡,室温越低,细胞越多,所需染色时间越长或应适当增加染液量,因此染色时间应视具体情况而定.特别是更换新染料时必须经试染,摸索最佳染色条件.

　　6) 染液不可过少,以防蒸发干燥染料沉着于血片上难冲洗干净.

　　7) 冲洗时应用流水将染液冲去.不能先倒掉染液,以免染料沉着于血片上.

　　8) 染色过深可用甲醇或酒精适当脱色,最好不复染,必须复染时,可将染液先稀释好再复染.

　　9) 染色时应注意保护血膜尾部细胞,不能划掉.因为体积较大细胞常在此处出现.

染色结果

　　在正常情况下血膜外观为粉红色，在显微镜下红细胞呈肉红色;白细胞胞浆能显示各种细胞的特有色彩，细胞核染紫红色，染色质清楚，粗细松紧可辨。染色结果偏酸，则红细胞和嗜酸性粒细胞颗粒偏红，白细胞核呈浅蓝色或不着色;染色结果偏碱，则所有细胞染成灰蓝色，颗粒深暗，嗜酸性颗粒可染成暗褐色，甚至紫黑色或蓝色。嗜中性颗粒偏粗，偏碱(紫黑色).血片原处呈绿色.

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