冰冻切片固定时间对组织的影响

冰冻切片是一种常见的组织处理方法，涉及到切片前的固定处理。正确的固定方法可以保证切片的质量，但是时间过长或者过短都会对组织产生不良的影响。那么，到底冰冻切片一般固定多久呢？以下从不同角度进行探讨。

冰冻切片的组织结构特点

组织冰冻切片是指将新鲜组织在-20℃至-80℃冰冻下来，并用冰冻微切器切成厚度20-50μm的薄片。冰冻切片通常用于组织学、免疫学、分子生物学等领域中，这是因为冰冻切片能够保持组织的形态、结构和成分等特点，同时切片时无需加蜡，也可以保留组织活性。（邓义，2019）。

组织切片固定的作用是，保持组织的形态结构，同时通过固定化学键的形成，防止细胞、组织以及药物等因为热力变性、自溶或者自动氧化而失去重要信息。不同组织部位之间的固定时间是不同的。（Luna，1968）。

组织冰冻切片固定时间探讨

固定时间短会造成什么影响？

固定时间过短会导致组织的形态改变严重，以至于无法判断是假结构还是真结构，而且对于紫血球、细胞几乎没有任何保护作用。（Luna，1968）

以肝为例子，H&E染色显示，4h-RP的肝细胞核，染色分布相对分散，且因为样品的形变严重而形成凹形断层；24h-RP的肝细胞核，染色分布较为均匀，核细胞胶浸包围明显，组织形态完整。（崔静等，2017）

固定时间长会造成什么影响？

固定时间过长，会导致细胞结构在固定液中过度发生烷基化反应，进而影响到切片的成型和质量。以肝脏为例子，当固定时间达到12个小时时，肝细胞失去原有的形态，细胞内的嗜银纤维和背景色染色不明显，以至于对诊断有很大的影响。（Fatima et al.，2018）

什么样的组织需要更长的固定时间？

早熟禾叶片、大鼠前脑以及犬脑在固定时间长短方面有所不同，由于禾叶片固定时间过短会导致组织的形态改变，因此需要较长的固定时间。但是，太长的固定时间会导致禾叶片失去显微镜观察禾叶片中细胞核的能力，而是变成了黑色的团块，无法排除禾叶片的颜色对固定反应的影响。而对于大鼠前脑来说，过短的固定时间会严重影响组织形态，而过长的固定时间会导致大鼠前脑的神经纤维降解，因此大鼠前脑的固定时间应该控制在2-4小时之间。（张涛等，2016）

结论

固定时间不同会影响到组织的形态、结构和成分等特点，因此正确的固定方法和时间是保证冰冻切片质量的关键步骤。合适的固定时间与不同组织有关，需要在实验前进行调研、测试和观察。总的来说，合适的固定时间可以保持组织结构的完整，同时也可以保持切片的质量，实现更好的组织和细胞观察。（邓义，2019）